Produktuak

Proteoma osoko fosforilazio-gertaeren analisia oraindik ere erronka analitiko handia da, proteina-fosforilazio-sareen konplexutasun izugarria delako.Lan honetan, Lys-N, Lys-C eta tripsinaren osagarritasuna ebaluatzen dugu, fosfoproteomaren analisi globalean laguntzeko duten gaitasunari dagokionez.pH baxuko katioi-truke sendoaren bertsio findu bat erabili zen N-terminalki azetilatu, fosforilatu eta aldatu gabeko peptidoak modu eraginkorrean bereizteko.Guztira, 5036 fosfopeptido erredundanteak identifikatu ahal izan dira, 1 mg proteinatik % 1eko aurkikuntza-tasa faltsu batekin hiru entzimen konbinazioa erabiliz.Gure datuek agerian utzi zuten proteasa ezberdinekin sortutako fosfopeptidoen datu-multzoen arteko gainjartzea marjinala zela, eta antzeko sortutako bi datu triptikoen arteko gainjartzea gutxienez 4 aldiz handiagoa zela aurkitu zen.Modu honetan, Lys-N eta tripsinaren erabilera paraleloak detektatutako fosfopeptidoen kopurua % 72 handitzea ahalbidetu zuen d tripsinarekin bakarrik alderatuta, eta tripsinaren erreplika esperimentuak % 25eko igoera besterik ez zuen ekarri.Horrela, tripsina eta Lys-N datuetan soilik zentratuz gero, erredundantrik gabeko 4671 fosfopeptido identifikatu genituen.Detektaturiko guneen azterketa gehiago ikusi zen Lys-N eta tripsina datu-multzoak fosforilazio-motibo nabarmen ezberdinetan aberastu zirela, eta gehiago frogatuz multiproteasa-ikuspegiak oso baliotsuak direla fosfoproteomaren analisietan.