Produktuak

Colicina E1 kanalaren domeinuaren mintz topologia fluoreszentzia erresonantzia energia transferentziaz (FRET) aztertu zen.FRET-ek genetikoki kodetutako aminoazido fluoreszente bat (kumarina) parte hartzen zuen emaile gisa eta DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimida) loturiko zisteina-hondar selektibo bat FRET hartzaile gisa.Kumarina-hondar fluoreszentea proteinan sartu zen tRNA/aminoacil-tRNA sintetasa bikote ortogonal baten bidez, kolizina kanalaren domeinuko edozein gunetan selektiboa txertatzeko aukera ematen zuena.Aldaera bakoitzak kumarina txertatzeko stop (TAG) mutazio bat eta DABMI eranskinerako zisteina (TGT) mutazio bat zituen.1-6 helizeen arteko helize arteko sei distantzia zehaztu ziren FRET analisia erabiliz, bai egoera disolbagarrirako bai mintzarekin loturiko.FRET datuek 3-6 helizeen arteko distantzia interhelikoetan aldaketa handiak erakutsi zituzten mintza-elkartean kanal-domeinuaren mintzari loturiko egiturari buruzko ikuspegi berria emanez.Oro har, kumarina-DABMI FRET efizientzia arteko helikopteroak gutxitu egin ziren mintza lotzean, kolizina kanalaren aterki-ereduan oinarrituta.Kanalaren domeinuaren egoera itxiaren behin-behineko eredu bat garatu zen, egungo eta aurretik argitaratutako FRET datuetan oinarrituta.Ereduak 1-7 helizeen antolamendu zirkularra iradokitzen du erlojuaren orratzen noranzkoan zelulaz kanpoko albotik eta 1., 6., 7. eta 10. helizeen mintz-interfacial-elkartetik 8. eta 9. helizeek osatutako mintz-transbertsoko ile-horntzaren inguruan.