Produktuak

Glukosiltransferasetarako errendimendu handiko kromatografia likidoaren saio berria, azido antranilikoarekin eta fluoreszentzia-detekzioan oinarritutako derivatizazioan.

Azido 2-aminobenzoikoaren (2AA; azido antranilikoa, AA) etiketatze-kimika berezia erabiliz garatu ziren β1-4 galaktosiltransferasaren (GalT-1) eta α2-6 sialiltransferasaren (ST-6) jarduerak neurtzeko errendimendu handiko likidoaren bidez. kromatografia (HPLC) fluoreszentzia-detekzioarekin (Anumula KR. 2006. Advances in fluoreszence derivation methods for high-performance liquid chromatography analysis of glycoprotein carbohydrates. Anal Biochem. 350:1-23).N-Azetilglukosamina (GlcNAc) eta N-acetyllactosamine hartzaile gisa erabili ziren eta uridina difosfatoa (UDP)-galaktosa eta zitidina monofosfatoa (CMP)-N-acetylneuraminic acid (NANA) GalT-1 eta ST-6 emaile gisa, hurrenez hurren.Produktu entzimatikoak in situ etiketatu ziren AArekin eta substratuetatik bereizi ziren TSKgel Amide 80 zutabean fase normaleko baldintzak erabiliz.Entzima-unitateak gailur eremuetatik zehaztu ziren Gal-β1-4GlcNAc eta NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc aldi berean deribaturiko estandarrekin alderatuta.Linealtasuna (denbora eta entzimaren kontzentrazioa), zehaztasuna (saien barne eta artekoa) eta errepikagarritasuna ezarri ziren.Entseguak isolamendu eta arazketa garaian entzimaren jarduerak kontrolatzeko erabilgarriak direla ikusi da.Entseguak oso sentikorrak ziren eta azukre erradioaktiboetan oinarritutako neurketa tradizionalen berdinak edo hobeak izan ziren.Entsegu formatua beste transferasen jarduera neurtzeko ere erabil daiteke, baldin eta karbohidrato-hartzaileek etiketatzeko muturra murrizten badute.Glikoprotein-hartzaileen saiakuntza bat garatu zen IgG erabiliz.IgG glikanoak bereizteko HPLC profilaren metodo labur bat garatu zen (G0, G1, G2, mono- eta disializatuak), GalT-1 eta ST-6 jarduerak modu azkarrean zehaztea erraztu zuena.Gainera, profilak egiteko metodo honek baliagarria izan behar du ingurune klinikoetan IgG glikanoen aldaketak kontrolatzeko.