Produktuak

5-fluorourazilaren (5-FU) eta bi nukleotido monofosfato endogenoaren hainbat metabolito zehazki kuantifikatzeko, kromatografia likido-tandem masa-espektrometrian (LC-MS/MS) oinarritutako metodo original bat garatu dugu.Entsegu honek honako hauek zehaztea ahalbidetu zuen: (i) 5-FU edo 5-fluoro-2′-desoxiuridina (5-FdUrd) 5-fluoro-2′-desoxiuridina-5′-monofosfatoaren (5-FdUMP) zelula barneko ekoizpena. , (ii) 5-FdUMP kontzentrazioa zelula barneko 2′-desoxiuridina-5′-monofosfatoan (dUMP)/timidina-5′-monofosfato (TMP) erlazioan duen eragina, eta (iii) 5-FdUMP-ren jariatze-maila eta ABC garraiatzaileen bidez hazitako giza zeluletatik 5-FU.Gure baldintza esperimentaletan, zelulak 5-FU edo 5-FUrd-ekin inkubatu ziren.Ondoren, proteina zelularrak metanolak hauspeatu zituen.Prozedura honek erauzketa berreskuratze handia eman zuen.Horrez gain, zelulen 5-FU eta 5-FdUMP jariapena neurtzeko, molekula horien kuantifikazioa egin dugu laborantza medioan.Hedabideak zuzenean injektatu ziren (5-FU) edo fase solidoan atera ziren Oasis Wax erauzketa kartutxoa erabiliz (5-FdUMP).Analitoen bereizketa dC18 Atlantis 3,5 μm, (100 mm × 2,1 mm id) zutabe batean egin zen, modu isokratikoan amonio formiatoa tampona/metanola/ura (5/5/90, v/v) fase mugikor gisa erabiliz.Iraupena ez zen 6,2 minututik gorakoa izan.Analitoak elektrospray interfazean ionizatu ziren ioi negatiboen moduan.Metodoa 2,5-150 ng mL -1 tartean balioztatu dugu konposatuen arabera.Entsegu barneko eta arteko aldakortasuna % 10 baino txikiagoa izan zen zazpi egunetan.Konposatu guztiak egonkorrak ziren zeluletan edo kultura-euskarrian laginak gutxienez bi astez -20 °C-tan gordetzen zirenean eta hiru izozte-desizozte zikloren ondoren.Bi komunikabideetan ez da matrize-efekturik ikusi.