Produktuak

Proteinen fosforilazioak hainbat funtzio zelular erregulatzen ditu eta funtsezko eginkizuna betetzen du landareen garapen hasieran.Arabidopsis plantuletan proteinen fosforilazioari buruzko aurreko ikerketak osatzeko eta zabaltzeko, desnaturalizatzailerik gabeko baldintzetan proteina-erauzketa konbinatzen duen ikuspegi alternatibo bat erabili dugu, desnaturalizaziorik gabeko baldintzetan metal-ioi afinitate kromatografia inmobilizatuarekin (IMAC) fosfoproteina osorik aberastuz Rubisco-agortutako extractetan, eta ondoren identifikazioarekin. bi dimentsioko gel elektroforesia (2-DE) eta kromatografia likidoa-tandem masa espektrometria (LC-MS/MS) erabiliz.Gelan tripsinaren digestioak eta hautatutako gel-guneen azterketak 144 peptido eta hondakin fosforilatu identifikatu zituzten, eta horietatik 18 fosfopeptido eta 8 fosfosito baino ez ziren aurkitu PhosPhAt 4.0 eta P3DB Arabidopsis thaliana fosforilazio guneen datu-baseetan.Identifikatutako 82 fosfoproteinetatik erdiak baino gehiagok karbohidratoen metabolismoan, fotosintesi/arnasketa edo estres oxidatiboaren erantzun mekanismoetan parte hartu zuten.2-DE eta LC-MS/MS baino lehen fosfoproteina osorik aberastea treonina eta tirosina hondar fosforilatuen detekzioa hobetzen duela dirudi, peptido-mailako aberastea erabiltzen duten metodoekin alderatuta, bi ikuspegiak fosforilazio gunearen estaldurari dagokionez zertxobait osagarriak direla iradokitzen du.Plantul gazteen emaitzak Arabidopsis hosto helduetarako aurretik lortutakoekin alderatuz gero, ehun horietan ezberdin fosforilatuta dauden bost proteina identifikatu ziren, teknika honek landareen garapenean proteinen fosforilazioaren dinamika ikertzeko duen potentziala frogatuz.