Produktuak

Fluoreszeinaren eta fluoreszeinaren metil esterraren monogalaktopiranosidoak: sintesia, β-galaktosidasa biotinilatuaren bidezko hidrolisi entzimatikoa eta translazio-difusio-koefizientearen determinazioa.

Fluoreszeina monoglikosidoak (d-galaktopiranosidoa (FMG) eta d-glukopiranosidoa) eta haien metil ester (MFMG) azetobromoglukosa/galaktosa eta fluoreszeina metil esterrez prestatu dira etekin onetan.Galakto deribatuen hidrolisi entzimatikoko esperimentuak (β-galaktosidasa biotinilatua erabiliz) egin dira eta parametro zinetikoak kalkulatu dira.Hidrolisian fluoreszentzia-intentsitatearen 15-20 aldiz handitzea ikusi da.Fluoreszentziaren hazkunde lineala nabaritu da denbora laburrean eta substratuaren kontzentrazio baxuan, konposatu hauek galaktosidasetarako zunda erabilgarriak eta sentikorrak bihurtuz.MFMGren Michaelis-Menten konstantearen (Km) balioaren magnitudea FMGarena baino handiagoa da substratu fluorogenikoaren konformazio aldaketa posible bat iradokitzen duena.FMG-rekin β-Gal biotinilatuaren Km balioa entzimaren jatorrizkoa baino txikiagoa da.Behaketa honek entzim biotinilatuaren substratu-afinitate handiagoa adierazten du entzim naturalarekin alderatuta.Translazio-difusio-koefizienteak neurtu dira, bai substratu fluorogenikoetarako, bai produktuetarako, fluoreszentzia-korrelazio-espektroskopia erabiliz.Substratu fluorogenikoen translazio-difusio-koefizienteak eta hidrolisi entzimatikoko produktuak antzekoak direla neurtu da, 3,5-4,5 × 10-10 m2 s−1 tartean.Beraz, substratuaren eta produktuaren translazio-mugikortasunaren desberdintasunaren ondorioz zinetika entzimatikoaren hobekuntza edo atzerapena ez da horren agerikoa.