Produktuak

Aldibereko mutazioen efektuak jarduera entzimatikoa aldatzeko konbinatzen duten modua ez da erraz aurreikusten, efektu horiek ez baitira beti modu linealean gehigarriak.Horregatik, substratua lotzen duten aminoazidoen hondakinen aldibereko mutazioen efektuen karakterizazioak ekarpen handia egin dezake entzimen substratuaren espezifikotasuna ulertzeko.Spodoptera frugiperdaren (Sfbetagly) beta-glikosidasan, Q39 eta E451 hondakin biek substratuarekin elkarreragiten dute eta hori ezinbestekoa da substratuaren espezifikotasuna definitzeko.Sfbetagly-ren mutante bikoitzak (A451E39, S451E39 eta S451N39) gunera zuzendutako mutagenesiaren bidez prestatu ziren, bakterioetan adierazi eta afinitate-kromatografia erabiliz araztu ziren.Entzima hauek substratu gisa p-nitrofenil beta-galaktosidoa eta p-nitrofenil beta-fukosidoa erabiliz karakterizatu ziren.Q39 eta E451 posizioetan gunera zuzendutako mutazioak dituzten Sfbetagly mutante bakarreko eta bikoitzeko k cat/Km ratioa erabili zen mutazio bikoitzen (Gdouble) ESdouble daga (entzima-trantsizio egoera konplexua) energia askearen eragina duela frogatzeko. daggerxy) ez da mutazio bakarren ondoriozko ondorioen batura (Gdouble daggerx eta Gdouble daggery).Gdouble daga-ren desberdintasun honek mutazio bakarren ondorioak partzialki gainjartzen direla adierazten du.Hori dela eta, efektu komun hau behin bakarrik zenbatzen da Gdouble daggerxy-n.Beta-glikosidasi buruzko datu kristalografikoek agerian uzten dute Q39 eta E451 hondakinak eta substratuaren hidroxilo talde bera dituen hidrogeno lotura bidentatua dagoela.Hori dela eta, datu termodinamikoak zein kristalografikoak iradokitzen dute Q39 eta E451 hondakinek elkarrekiko eragina dutela substratuarekin dagozkien elkarrekintzetan.